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是采用色譜技術(TLC、GC和HPLC)分離測定光學異構體藥物的有效方法。由于許多藥物的對映體(Enantiomer)之間在藥理、毒理乃至臨床性質方面存在著較大差異，有必要對某些手性藥物進行對映體的純度檢查。
（一）原理和方法：對映體化合物之間除了對偏振光的偏轉方向恰好相反外，其理化性質是*相同的，因而難以分離。傳統方法（分步結晶法、酶消化法等）有很大局限性，特別是難以進行微量分離和測定。60年代前后，TLC、GC法逐漸用于對映體化合物的拆分。但這兩種方法只能拆分不多的化合物，且需要較復雜的樣品處理步驟，制備分離也難以進行。80年代初HPLC法迅速成為藥物對映體分離和測定為廣泛應用的方法。
HPLC用于手性分離概括起來可分為兩大途徑：間接(CDR)和直接(CMPA、CSP)方法。
間接方法主要基于外消旋體混合物經柱前衍生化形成一對非對映異構體(Diastereoisomers)。此法又稱為非對映體拆分法或柱前手性衍生化法。由于d-型和l-型對映體的物理性質*相同，只能在手性固定相上才能獲得拆分；如果利用對映體分子中的反應基團與某一光學純試劑反應形成了非對映光學異構體混合物，其物理性質就有較大的差異，因而可在普通固定相（非手性固定相）上實現分離。本法需高光學純度的手性衍生化試劑(Chiral Derivatization Reagent,CDR)，衍生化反應往往比較繁瑣費時；各對映體衍生化反應的速率有時也不相同。由于可采用價格便宜、柱效較高的非手性柱和通過適當的衍生化反應可提高檢測的靈敏度，以及衍生化過程中可伴隨樣品的純化等優點，柱前手性衍生化的方法仍然是當前手性藥物拆分、尤其是生物樣品中藥物對映體分離和測定的常用方法。
直接方法主要采用手性流動相添加劑(Chiral Phase Additives,CMPA)法和手性固定相(CSP)法。CMPA法又可稱為手性流動相(CMP)拆分法或手性洗脫法。它不必事先將樣品制備成衍生物，而只須將手性劑加入流動相中。手性添加劑與樣品所形成的各種手性絡合物雖然不及CDR法所形成的衍生物那樣牢固，但它所依據的手性識別作用和絡合物的非對映異構體性質卻基本相同。常用的CMPA有：環糊精(Cyclodextrins)類（主要是α-、β-和γ-環糊精及其衍生物）；手性離子對配合劑(Chiral Ion Pair Complex,CIPC)，如（+）-10-樟腦磺酸、奎寧和奎尼丁等；以及配位體交換型手性流動相添加劑(Chiral Ligand-exchange Complexes,CLEC)，其中手性配位體多為光活性氨基酸或其衍生物，再與二價金屬離子形成螯合的配位化合物，以適當的濃度分布于流動相中，遇有藥物消旋體時即可形成相應的非對映體配位化合物對，然后在正相柱或反相柱上完成拆分。近年來CSP法發展迅猛，應用日益廣泛。它是不經轉變成非對映體而直接拆分的方法，優點是：適用于不含活潑反應基團的化合物；除非必須衍生化，否則無需高光學純度試劑；樣品處理步驟簡單。但迄今為止，CSP柱商品已有40多種，價格大多昂貴，尚未有一種具有類似ODS柱的普遍適用性。根據分子結構選擇合適的CSP柱是非常重要的。常用的CSP有：手性電荷遷移配位體固定相，如 Pirkle型HPLC-CSP；蛋白親和配體固定相，如 Enantiopac(LKB)；內部配位化合固定相，如環糊精(Cydobond)和纖維素酯(Chiracel)等；以及配基交換固定相，如L-脯氨酸-Cu2+共價鍵合于聚苯乙烯等基質上。
CSP拆分對映體的理論概念：在HPLC的CSP柱上拆分對映體是利用藥物對映體和特制的、在硅膠上鍵合的對映體固定相（CSP）之間所形成的非對映體復合物。由于非對映體復合物穩定性差異，可使兩個對映體的保留時間不一致，與CSP形成穩定性較差的非對映體的藥物對映體可先洗脫，因之實現了拆分。CSP設計是基于Dalgliesh在1952年提出的“三點手性識別模式”(Three-point chiral recognition model)，認為要實現手性識別，在手性化合物分子與CSP之間至少同時要有三個相互作用部位，其中之一必受空間影響，或是相互吸引或是相互排斥。生成的非對映體的相對強度，決定了兩個對映體的分離度和洗脫次序。
（二）三類手性分離方法的比較：CDR法的優點是應用條件相對簡易，只需采用普通HPLC的固定相和流動相即可而且通過衍生化有利于增加檢測（紫外或熒光）靈敏度；缺點是樣品中相關化合物須預先分離、衍生化手性試劑的光學純度的高要求以及異體對的衍生化反應速率不一。
CMPA法的優點是不必作柱前手性衍生化；對固定相也無特殊要求；樣品的非對映異構化絡合具有可逆性而且利于制備。主要缺點是可拆分的化合物范圍有限；某些添加劑不夠穩定而且往往會干擾檢測。
CSP法的優點較多，能廣泛適用于各類化合物，適于常規及生物樣品的分析測定，制備分離方便，定量分析的可靠性較高，采用此法研究考察的化合物已達數千種之多。缺點是樣品有時也須作柱前衍生（但不一定是手性衍生化試劑），對樣品結構有一定限制，其適用性尚不及普通HPLC固定相（包括正相和反相）那樣廣泛。
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